Bircan, RıratArat, SezenCaner, Müge2024-07-122024-07-1220080374-9096https://search.trdizin.gov.tr/yayin/detay/78874https://hdl.handle.net/20.500.12415/9201Hepatit B virus (HBV) enfeksiyonlarının immünopatogenezi ile ilgili çalışmalara önemli katkıları olan transgenik fare modellerinin geliştirilmesi, yaklaşık 20 yıldan bu yana devam etmektedir. Bu amaçla tüm HBV genomunu ya da seçilmiş viral genleri taşıyan çeşitli soylar geliştirilmiş ve HBV replikasyon ve patogenez mekanizmalarının aydınlatılmasındaki yararları vurgulanmıştır. Bu çalışmada HBV taşıyıcısı bir fare modelinin geliştirilmesi ve üretilmesi amaçlanmıştır. Bunun için mikroenjeksiyon yöntemi ile fare embriyolarına tüm HBV genomu aktarılmış, transgenik manipülasyon sonrası fare yavrularından HBV taşıyıcısı olanlar HBV-DNA molekülünün replikasyonu ve ekspresyonunun gösterildiği moleküler yöntemler ile saptanmıştır. Transgen aktarımı TÜBİTAK Marmara Araştırma Merkezi Transgen Laboratuvarı'nda gerçekleştirilmiştir. HBV-DNA taşıyan fareler, kuyruk dokularından elde edilen DNA örneklerine uygulanan polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ve fare serumlarına uygulanan dot-blot hibridizasyon yöntemiyle belirlenmiştir. Transgenik farelerde integre HBV-DNA varlığı, fare karaciğer doku kesitlerine uygulanan in situ hibridizasyon yöntemiyle saptanmıştır. HBV-DNA moleküllerini taşıyan fare karaciğerlerinden izole edilen total RNA molekülleri, revers transkriptaz PCR yöntemiyle saptanmış ve HBV-DNA ekspresyonunun gerçekleştiği gösterilmiştir. HBV taşıyıcı farelerde, HBsAg varlığı karaciğerde immünohistokimyasal yöntemle gösterilmiş, ayrıca HBsAg ve HBeAg pozitifliği ELISA yöntemi ile tespit edilmiştir. HBV genomu aktarılan fare embriyolarından yaklaşık %10'nunda HBV genomu, ekspresyonu ve ekspresyon ürünü saptanmıştır. Heterozigot taşıyıcı fareler kendi aralarında çiftleştirilerek homozigot HBV transgenik fare soyu elde edilmiştir. Geliştirdiğimiz bu HBV transgenik fareler, ülkemizde üretilen ilk transgenik fareler olma özelliği taşımaktadır. Tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de önemli bir sağlık sorunu olan HBV enfeksiyonlarının ve virüsün patogenezi ile ilgili çalışmalarda, ürettiğimiz bu taşıyıcı transgenik farelerin katkısı olacağı düşünülmektedir.trinfo:eu-repo/semantics/openAccessArticle811717887442