Relationship between ISX gene expression and cancer stem cell markers in hepatocellular carcinoma cells exposed to microenvironmental changes / Mikroçevre değişimlerine maruz kalan hepatosellüler karsinom hücrelerinde ISX gen ekspresyonu ile kanser kök hücre belirteçleri arasındaki ilişki

Aim: This study aimed to demonstrate the homeobox (ISX) protein, which is a newly identified proto-oncogene and known to be associated with hypervitaminosis A disease at the level of ISX gene expression by culturing hepatocellular carcinoma (HCC) cell line in different extracellular matrix media and to show the effect of culture media differences on cancer stem cell markers. Material and Methods: HepG2 cells were cultured in type I collagen and matrigel culture media, and the expression of the ISX gene was investigated using realtime PCR, and changes in the cellular amounts and localizations of alpha-fetoprotein (AFP), stem cell markers OV-6 and Nanog proteins were investigated using a confocal microscope. Results: ISX expression was detected 4-fold higher in the Matrigel and 2-fold higher in the type I collagen culture than the control group. The Oct-4 antibody is significantly higher in the type I collagen culture (p<0.05) and the Nanog antibody showed a significant decrease in the Matrigel culture than the control group cells (p<0.05). Ov-6 and AFP antibodies are the highest type I collagen but there are no statistical significance was found (p>0.05). Conclusion: It is thought that the results obtained from this study may help further studies on the mechanisms of liver cancer and the development of treatment options that will affect the behavior of cancer stem cells.

Amaç: Bu çalışmada yeni tanımlanan bir proto-onkogen olan ve vücutta çok fazla A vitamini birikmesiyle ortaya çıkan hipervitaminoz A hastalığıyla ilişkili olduğu bilinen homeobox (ISX) proteininin, Hepatoselüler karsinom (HCC) hücre hattının farklı ekstrasellüler matriks ortamlarda kültüre edilmesiyle, ISX gen ekspresyonu düzeyinde gösterilmesi, ayrıca kültür ortam faklılıklarının kanser kök hücre belirteçleri üzerindeki etkisinin değerlendirmesi amaçlanmıştır. Materyal ve Metodlar: Karaciğer karsinom hücre hattı olan HepG2 hücreler tip I kollajen ve matrigel kültür ortamlarda kültüre edilerek, ISX geninin ekspresyonu real time PCR kullanılarak, alfa-fetoprotein (AFP), kök hücre belirteçleri olan OV-6 ve Nanog proteinlerinin hücresel miktarları ve lokalizasyonlarındaki değişiklikler konfokal mikroskop ile araştırılmıştır. Bulgular: ISX gen ekspresyonu, kontrol grubuna göre Matrigel kültür ortamda 4 kat, tip I kolajen kültürde ise 2 kat daha fazla tespit edilmiştir. Oct-4 antikorunun ekspresyonu tip I kollajen kültür ortamında kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede yüksektir (p<0,05). Nanog antikoru, kontrol grubuna göre Matrigel ortamda HepG2 hücrelerinde anlamlı bir azalma gösterirken (p<0,05), Ov-6 ve AFP ekspresyonu en yüksek tip I kollajen ortamda görülmüş ancak istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır (p>0,05). Sonuç: Bu çalışmadan elde edilen sonuçların karaciğer kanseri mekanizmaları ve kanser kök hücrelerinin davranışını etkileyecek tedavi seçeneklerinin geliştirilmesi konusunda yapılacak ileri çalışmalara yardımcı olabileceği düşünülmektedir.